抗生素車間菌種室設計方案抗生素車間菌種室設計方案
抗生素車間菌種室設計本公司(案例分享)一、前言
隨著世界經濟一體化的漸漸形成,我國各行各業(yè)與國際接軌正緊張進行著,八十年代以來,各種認證:GMP、FDA、ISO9001等對制藥企業(yè)進行著一遍遍的洗禮,但它們似乎都忽略了抗生素企業(yè)的一個重要環(huán)節(jié)一茵種室。試想如果沒有一個潔凈合理的菌種操作環(huán)境,如何能保證高質量的種子,沒有高質量的種子更不能保證抗菌素的高技經指標。本文本公司旨在探討如何設計高標準的菌種室,并呼吁廣大抗生素車間設計人員,在重視制藥企業(yè)設計符合GMP要求的同時,不要忽略了菌種室。
二、優(yōu)質種子的制備要想使菌種室設計得合理,首先應了解菌種是如何制備的。一般抗生素菌種都有兩種功能:一是保障提供生產用優(yōu)質種子,二是做試驗,篩選單位更高的菌種。因此必須有兩套無菌室,一套用于生產,一套用于試驗選種,二者不可混淆,以免影響生產。抗生素菌種的篩選是一項復雜而細致的工作,想得到生產上用的優(yōu)質種子,必須要經過嚴格的菌種選育工作。
1、優(yōu)質種子必須具備下列五項條件:
(1)菌種細胞的生長活力強,移種到發(fā)酵罐后能迅速生長以縮短遲滯期;
(2)生理狀態(tài)穩(wěn)定,以使得到穩(wěn)定的菌體生長過程;
(3)具有適宜的菌體總量及濃度以能滿足大容量發(fā)酵的要求;
(4)無雜菌污染,以確保整個發(fā)酵過程正常進行;
(5)保持穩(wěn)定的生產能力,使最終產物的生物合成量持續(xù)穩(wěn)定高產。
2、要想獲得如上所述的優(yōu)質種子,則必須具備如下五種條件:
(1)有一種能使保存的菌種轉移到存活力能達到最大的復活培養(yǎng)基上的方法;
(2)有一個不引起種子染菌的接種場所;
(3)具有定量判斷種子質量標準的方法;
(4)具有定量測定菌種一系列生理狀態(tài)變化的方法,以能正確地反映生物物質的連續(xù)變化;(5)選擇能滿足種子擴大培養(yǎng)的容器和其它環(huán)境條件。下面為以霉菌為例的菌種工藝流程圖。霉菌類孢子的培養(yǎng)多數采用大米、小米、麥麩等天然培養(yǎng)基。首先將保存于沙土管中的菌種抱子接種在雙碟平皿上,恒溫培養(yǎng),待孢子成熟后制成孢子懸浮液,然后接種到大米或小米等培養(yǎng)基上,培養(yǎng)成熟后成為“親米”,由“親米”再轉到大米或小米培養(yǎng)基上,培養(yǎng)成熟后稱為“生產米”,用“生產米”接入種子罐內,“親米”和“生產米”的培養(yǎng)溫度一般為25~28℃,培養(yǎng)時間隨菌種不同而異,一般為4~14天。為了使通氣均勻,在培養(yǎng)過程中要注意翻動。按一定接種量接人發(fā)酵瓶,模擬生產過程的試驗,可以摸索菌種生長代謝的最佳工藝條件,并篩選活性最高的菌種保存?zhèn)溆?。制備好的大米或小米抱子,可放在5℃冰庫中保存?zhèn)溆?,或將大米或小米抱子用真空抽干滾砂留種,這種干燥抱子菌種可在生產上連續(xù)使用半年左右,這對穩(wěn)定生產很有好處。在制備霉菌池子時,根據經驗通過顯微鏡數抱子數,挑選合適的10倍系列稀釋抱子懸液,以使平皿生長的菌落盡可能分散,以每皿2-3個為最理想。菌落一般長至直徑8~10turn為適,接種時應選取中央豐滿部分的抱子,不要觸及菌落邊緣的菌絲。制備大米抱子時,抱子懸浮液的濃度要適當,應根據菌種特性來決定適當濃度。接種使用后的吸管隨即插人肉湯內浸一下作無菌檢查。當接種完畢后,應將大米等固體培養(yǎng)基敲翻一次,使抱子懸浮液同培養(yǎng)基混合均勻,待抱子成熟后移至5℃冰箱或冰庫中保存?zhèn)溆谩?br />3、菌種定平面布置設計及注意事項下圖為依據GMP規(guī)范所設計的菌種室平面布置圖(見圖2)。
3.1在設計中應注意如下問題:
(1)一般菌種室都設置在發(fā)酵生產車間種子罐操作平面上,如確因空間緊張,也可移至低一層平面。
(2)根據GMP要求萬級潔凈房間需。經更衣,并淋浴后進人,而且要有與萬級潔凈區(qū)相適應的洗衣房、潔具及潔具清洗間(淋浴室可根據實際情況確定是否設置)。
(3)凡萬級
潔凈室墻壁需耐清洗消毒的壁板,門窗為不銹鋼或彩鋼板,地面采用水磨石,各種陰陽角均為圓弧狀。
(4)萬級
潔凈室送風要單獨成一系統,以免其它崗位的回風污染無菌室的環(huán)境。臨性產、試驗用無菌室分別單獨設置,確保生產、試驗兩不誤,無菌室內放置雙人超凈工作臺以提供局部百級的無菌操作空間。
(5)搖瓶間是接種后種子擴大培養(yǎng)的地方,培養(yǎng)時間一般較長,而且根據菌種特性還需補料,進出操作頻繁,因而單獨設置。
(6)恒溫室分為兩類,以霉菌培養(yǎng)為例,一類用于菌種傳代或擴大培養(yǎng),溫度25士0.5℃,濕度50%士5%,搖瓶間即屬于此類恒溫室。另一類用于無菌檢查,溫度37t0.st,濕度50%t5%,為方便操作,無菌室和恒溫室均由雙層玻璃隔斷與操作間隔開。
(7)為了給生產準備優(yōu)質種子和篩選高單位茵種,菌種室每天都要配制不同類型的培養(yǎng)基,用到許多天然培養(yǎng)基和化學試劑,各種三角瓶、試管、平皿等玻璃器皿更是數以千計,還有其它輔助材料,如棉花、紗布、牛皮紙、濾紙等,因而設置了試劑庫和材料庫。
(8)以制備霉菌抱子為例,待米抱子成熟后,放人真空干燥器中抽干,然后由雙扉消毒框傳人無菌室滾砂留種。消毒柜用于無菌室所用物品的消毒滅菌。
(9)制備好的砂上抱子或生產抱子,放入冰庫中保存?zhèn)溆?。冰庫為裝配式,配有專用的冷氣機,既保溫又潔凈。
(10)儀器室內設有光電天平、顯微鏡。自動效價測試等精密儀器。
四、本公司案例總結
菌種室是抗生素發(fā)酵車間至關重要的一個環(huán)節(jié),菌種室的設計要依據菌種制備工藝流程的特點,萬級潔凈室要符合GMP要求,這樣才能使菌種室布置得合理有序,確保為生產提供優(yōu)質種子。
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