PCR實驗室的壓差設置對于防止交叉污染至關(guān)重要。通常,PCR實驗室分為四個區(qū)域:試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。這些區(qū)域應保持相對獨立,不能互通,且需遵循嚴格的單向流程,即只能從試劑配制區(qū)到樣品處理區(qū),再到核酸擴增區(qū),最后到產(chǎn)物分析區(qū)。
壓差設置上,一般遵循以下原則:
· 試劑配制區(qū):設為微正壓區(qū)域,通常設定為正壓,如+15Pa,以防止外部空氣進入造成污染。
· 樣品處理區(qū):同樣設為微正壓區(qū)域,但壓力略低于試劑配制區(qū),如+10Pa或+5Pa,以防止含核酸的氣溶膠從試劑配制區(qū)進入。
· 核酸擴增區(qū)與產(chǎn)物分析區(qū):設為微負壓區(qū)域,如-5Pa至-20Pa,以防止含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品。
緩沖間的壓差設置也至關(guān)重要,以確保實驗室內(nèi)外空氣的有效隔離。常見的緩沖間壓差設置方式包括:
· 所有緩沖間相對于區(qū)域房間內(nèi)外,自身保持正壓或負壓狀態(tài)。
· 緩沖間與實驗區(qū)保持一致的壓力梯度。